Aplicação da tecnologia automatizada de esferas magnéticas para extração de DNA em diferentes artrópodes vetores

Costa, G. S.Mendonça, A. L. F. M.Silva, C. C.Pereira Júnior, A. M.

Resumo A Biologia Molecular tem se mostrado uma ferramenta essencial em laboratórios de saúde pública, pois proporciona avanços significativos no diagnóstico e tratamento de doenças e desempenha um papel crucial na prevenção e controle de epidemias. Considerando a necessidade de detectar agentes etiológicos de diversos vetores no serviço de saúde para aprimorar o conhecimento dos ciclos de transmissão de doenças que envolvem artrópodes, a análise molecular é uma alternativa para o diagnóstico rápido da infecção natural por esses organismos. Este estudo tem como objetivo padronizar kits comerciais automatizados de extração de DNA para obtenção do DNA de patógenos de diferentes vetores. Espécimes de flebotomíneos, carrapatos, pulgas e barbeiros recebidos no LACEN-RO foram triados e utilizados nos testes. Três kits foram avaliados: (i) Extracta Kit DNA and RNA from Pathogens (MPTA-PU16-B); (ii) Extracta Kit DNA from Bacteria (MBXD-PU16-B); e (iii) Extracta Kit DNA and RNA from Pathogens GOLD (MVXA-PU96 B/W Gold C). O protocolo específico foi utilizado para cada kit, e o dispositivo EXTRACTA® 32 foi utilizado para realizar a extração automatizada, seguindo as instruções do fabricante. As PCRs foram realizadas com primers para a região citocromo c oxidase subunidade I do DNA mitocondrial (COI) e primers específicos para Rickettsia spp., Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi. Os produtos da PCR foram detectados por eletroforese em gel de agarose, o que permitiu a observação do DNA amplificado, demonstrando o sucesso da técnica automatizada de extração de DNA vetorial. Esses resultados permitirão que futuros estudos epidemiológicos identifiquem de forma mais rápida e eficaz os vetores e seus parasitas envolvidos nos ciclos epidemiológicos de doenças que ocorrem no estado de Rondônia.