Transformação genética mediada por Agrobacterium e expressão estável do transgene em uva Muscat Ottonel (Vitis vinifera)
Alpamyssova, G.Aitkulova, R.Yermekbayeva, A.Kudasova, D.Mamytova, A.Shapalov, S.Juraboyevna, A. M.Alpamyssova, A.Yeginbay, A.
Resumo A videira (Vitis vinifera L.) é uma frutífera economicamente significativa, mas seu melhoramento genético por meio do melhoramento convencional é limitado devido à alta heterozigosidade e aos longos períodos de geração. A engenharia genética oferece uma alternativa promissora para aprimorar as características da videira sem alterar as principais características varietais. Este estudo relata a transformação bem-sucedida de plantas de uva Muscat Ottonel mediada por Agrobacterium tumefaciens, com foco em um protocolo eficiente utilizando explantes foliares e condições de cultivo otimizadas. Plantas transgênicas de uva Muscat Ottonel foram geradas por meio de um protocolo otimizado envolvendo explantes foliares pré-cultivados em meio de regeneração com 100 µM de acetosiringona, seguido de cocultivo com a cepa LBA4404 de A. tumefaciens contendo o vetor pCAMBIA2301 com os genes gus e nptII. Os explantes transformados foram selecionados em meios com 30 mg/L de canamicina e 200 mg/L de cefotaxima. A organogênese dos brotos foi potencializada com 4 g/L de fitoágar e 1,5 g/L de gelrite, resultando em uma eficiência de transformação de 66,66%. Ensaios histoquímicos de GUS, PCR, Southern blot e Northern blot confirmaram integração e expressão gênica estáveis em quatro das seis linhagens transgênicas. Vale destacar que as plantas transgênicas apresentaram expressão estável do gene gus sem desvios fenotípicos. Este estudo estabelece um protocolo confiável para a transformação da uva Muscat Ottonel mediada por Agrobacterium, demonstrando alta eficiência e expressão gênica estável. A ausência de resposta de hipersensibilidade na Muscat Ottonel durante a transformação contribuiu para a eficiência do processo. Este protocolo é valioso para futuros estudos genéticos e programas de melhoramento de videiras, visando à introdução de características benéficas, como resistência a doenças, em cultivares elite.
Texto completo