Ocorrência de resultados falso-negativos na reação de PCR em Tempo Real (PCR-TR) no diagnóstico da doença meningocócica

Fusakasawa, Lucila OkuyamaGonçalves, Maria GiseleHiga, Fabio TakenoriSalgado, Maristela MarquesLemos, Ana Paula Silva deSacchi, Claudio Tavares

Foram investigados os fatores que causam resultados falso-negativos (RF-N) nas reações de PCR-TR nodiagnóstico de N. meningitidis em amostras de soro e LCR. Considerando-se que a doença meningocócica deva ser rapidamente tratada pela alta letalidade e potencial epidêmico, o RF-N no ensaio diagnósticopode ocasionar falhas no tratamento e/ou na contenção da doença na comunidade. Portanto, é importanteelucidar os fatores que induzem RF-N na PCR-TR. Os RF-N ocorreram em virtude de inibição, baixa quantidade de DNA-alvo nas preparações de DNA e inadequada temperatura no procedimento de anelamento. Por ser altamente variável a concentração de DNA bacteriano em amostras clínicas, não foi possível definir o volume ideal de amostra a ser extraído. A temperatura a 60 °C para anelamento,recomendada para genogrupagem de N. meningitidis por PCR-TR, não foi adequada para genogrupos B e W135. Estes fatores ocasionaram a indução de RF-N em 31 amostras; consequentemente, 30 % das bactériasdetectadas pelo PCR-TR foram classificadas como não genogrupáveis. Inibidores e/ou baixa quantidade de DNA-alvo induzem RF-N, independentemente do volume de amostra utilizada na extração de DNA;entretanto, ajustes na temperatura de anelamento e na quantidade de amostra extraída adicionada na reação podem evitar a maioria destes RF-N.(AU)